粵微科研團隊在圍繞靈芝孢子油促進皮膚修復的研究上取得新突破。近日，具有前瞻性的科研成果《從靈芝中分離的活性成分通過TRPV1/SMAD信號促進燒傷創面愈合》（An active ingredient isolated from Ganoderma lucidum promotes burn wound healing via TRPV1/SMAD signaling）成功發表于著名國際期刊《AGING》。
項目負責人焦春偉博士介紹，“早在2020年，粵微就在國際權威期刊《AGING》上發表過《靈芝孢子油在早期皮膚傷口愈合中的作用：皮膚微生物群與炎癥的相互作用》。研究證明，粵微靈芝孢子油(GLSO)可通過調節皮膚微生物菌群促進皮膚傷口愈合，且具有良好的抗炎作用。但當時的研究對皮膚傷口愈合增殖的影響和潛在機制尚未完全了解。在本次研究中，我們再次以粵微靈芝孢子油作為實驗材料，采用網絡藥理學和實驗驗證相結合的方法，成功揭示了粵微靈芝孢子油可通過TRPV1和SMADs信號通路加速皮膚燒傷創面愈合，以及在皮膚創面愈合增殖期的潛在作用機制。”
盡管鎮痛藥、抗感染藥物和生長激素已廣泛用于深度燒傷以及醫美后遺癥的治療。但目前，能夠同時發揮抗感染和增殖作用的藥物很少見報道。本次研究成果，為粵微靈芝孢子油在皮膚屏障修復、傷口愈合及醫美后遺癥的修復應用奠定了基礎，具有積極意義。
在這項研究中，科研人員采用了粵微靈芝孢子油，研究了它在促進燒傷創面修復中的作用。通過進行天狼星紅染色以確定用粵微靈芝孢子油治療的皮膚傷口中膠原蛋白 I 與 III 的比例。
用 picrosirius 溶液（含0.1%Sirius Red的飽和苦味酸水溶液，pH 2.0）處理后，組織切片顯示膠原蛋白 I 為橙紅色，而膠原蛋白 III 顯示為淡綠色。
偏光顯微鏡下觀察，假手術組第 1 天和第 5 天的天狼星紅染色切片差異不大。在靈芝孢子油治療組中，相對于未治療（對照組）組，粵微靈芝孢子油組中膠原蛋白 I 含量（紅色區域）多于膠原蛋白 III 含量（綠色區域）。天狼星紅染色定量分析表明，與對照組相比，粵微靈芝孢子油組膠原蛋白I與III的比例顯著增加。
圖?2.?粵微靈芝孢子油對小鼠皮膚燒傷中膠原蛋白?I 與膠原蛋白 III 比例的影響HaCaT細胞是人類表皮細胞，廣泛用于驗證藥物的效果。在本研究中發現，相對于對照組，在開始用 60 μg/ml 粵微靈芝孢子油治療傷口 48 小時后，HaCaT 細胞增殖顯著增加。細胞遷移測定還表明，與對照組相比，60 μg/ml 粵微靈芝孢子油減少了劃痕距離并顯著增加了傷口閉合。圖 3. 粵微靈芝孢子油對 HaCaT 細胞的增殖和遷移作用科研人員通過對四個重合靶點的PPI和TGF-β信號通路進行分析，確定了 31 個靶點作為靈芝孢子油治療燒傷病的推定靶點，并發現 TRPV1 是粵微靈芝孢子油與燒傷病相關的潛在靶點中的一個重要蛋白質。
網絡數據集的結果表明，SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD7和TGF-β1是粵微靈芝孢子油推定靶標中最重要的蛋白質。TGF-β3也很重要，但影響比上述蛋白質小，假定目標的富集分析由KEGG進行并可視化。
分析表明，TGF-β信號通路是燒傷治療中靈芝孢子油活性最重要的通路。綜合網絡分析顯示，粵微靈芝孢子油可能通過與TRPV1和TGF-β信號通路相互作用來改善燒傷創面愈合。
圖 5.粵微靈芝孢子油?藥物成分目標的網絡藥理學分析SMAD2和SMAD3是最重要的蛋白質，是TGF-β信號通路的特征。因此，我們在以下實驗中檢查了SMAD2/3和?TRPV1?水平。
Western印跡分析顯示，與對照組相比，粵微靈芝孢子油處理后SMAD2/3磷酸化水平顯著增加，而SMAD2/3表達水平降低。免疫熒光染色結果顯示，與對照組相比，粵微靈芝孢子油明顯增加了皮膚燒傷創面中TRPV1的表達。用靈芝孢子油刺激的 HaCaT 細胞用于模擬體外燒傷模型。靈芝孢子油加速了 SMAD2/3核轉位，并在LPS刺激下明顯促進了這種轉位。
圖 6.?SMAD2/3 和 TRPV1 在小鼠皮膚燒傷中的表達分析通過SMAD2/3和TRPV1信號促進HaCaT細胞增殖
最后，為了驗證TRPV1是否通過增加TGF-β通路中最重要的信號蛋白SMAD2/3的表達來影響皮膚燒傷愈合，將HaCaT 細胞與TRVP1抑制劑預孵育3 小時或16小時，然后然后用靈芝孢子油孵育48小時。TRPV1抑制劑顯著下調了靈芝孢子油對細胞增殖的增強。
免疫熒光分析表明，與單獨的靈芝孢子油相比，添加TRPV1抑制劑明顯降低了TRPV1和 SMAD2/3的表達。
圖 7.?TRPV1 抑制劑對 HaCaT 細胞增殖的影響
實驗結果表明，粵微靈芝孢子油可通過刺激皮膚傷口的細胞增殖來改善燒傷愈合。在組織中，觀察到粵微靈芝孢子油可能提高TRPV1的表達，更快地啟動TGF-β/SMAD信號傳導，并促進SMAD2/3 核易位，從而加速皮膚傷口愈合從炎癥階段向增殖階段的進展。